二腹肌起点下颌骨的二腹窝，止于中间腱。二腹肌的功能是在舌骨下肌群活跃、稳定舌骨位置时，与舌骨上肌群一起使口张开。

二腹肌位于颌骨下方，有前后腹腱和中间腱，是颈动脉三角和下颌下三角的分界标志，同样也是颈颌面外科的主要标志。其表面有下颌后静脉、耳大神经和面神经分支。

深表有颈内动脉、颈外动脉、副神经、舌下神经和颈交感干。其上缘包括面部神经和耳后动脉、舌咽神经。下缘有舌下神经和枕动脉，二腹肌的前后腹部是重要的解剖标志。

中间由坚韧的结缔组织固定在舌骨大角和舌骨体的交界处。当舌骨固定后，肌肉可向下拉动下颌骨张开嘴，与上颌肌肉群的动作相反。